ISOHAIR EASY


產品編號 產品名稱 產品規格 產品等級 產品價格
319-07781 ISOHAIR?EASY 100次

從發根提取DNA試劑盒

ISOHAIR EASY


  本試劑可簡便地從發根提取DNA。提取到的DNA溶液無需純化,可直接用作核酸擴增法的模板。



◆特點


  從人的發根提取DNA,操作簡便,僅需30分鐘左右。

◆使用實例


  準備實驗材料(使用乙醇清洗毛發)

 ISOHAIR EASY



以ISOHAIR EASY為例


  1. 3根毛發(帶發根),使用剪刀剪斷發根約1.5 cm處。

    ※確認取得的毛發帶有發根(右圖)。*1

  2. 往1.5 mL離心管注入300 μL乙醇,再用鑷子*2放入3條發根。

  3. 倒轉混合幾次后,簡單清洗一下。取出發根,置于濾紙或無塵紙上,揮發乙醇。


提取核酸


  1. 將ISOHAIR EASY置于室溫,使其溶解,倒轉混合均勻后,降速,并靜置于冰塊上。

  2. 往0.2 mL離心管注入50 μL ISOHAIR EASY,再放入3條發根。

  3. 孵化

   55°C、孵化20分鐘*3

   94°C、孵化10分鐘

   置于冰塊上迅速冷卻至4°C

  4. 使用移液管混合后,將上清液移至1.5 mL離心管(盡量不取出不溶物),用作DNA提取液。*4

    ※使用本產品可從3根毛發提取1~6.5 ng/μL的DNA。*5

  *1 無法肉眼觀察到發根的材料或自然脫落的毛發可能無法提取到足夠的核酸。

  *2 為防止污染,每次使用鑷子前請使用乙醇清洗。

  *3 使用ISOHAIR EASY孵化毛發時,無法用肉眼觀察到變化,實際上,已有DNA析出。

  *4 若不溶物浮于上方,難以取出上清液,請將全部溶液移至1.5 mL離心管,進行離心(12,000 rpm×

     2 min)后,取出上清液。0.2 mL離心管的耐離心力較低,不建議使用。

  *5 根據個人發質,毛發提取DNA量有所不同。即使是同一個人的毛發,每根毛發的提取DNA量也不同。

 


◆Data 1: 實時PCR法的利用


  使用ISOHAIR EASY從A、B、C 3人的各3根毛發配制成2 μLDNA提取液,將其作為模板,使用GeneAce SYBR? qPCR Mix α No ROX,進行實時PCR,檢測出Gap基因(GAPDH)。(裝置:LightCyclerR 96

 

反應液組成:


2×GeneAce SYBR? qPCR Mix α No   ROX

12.5 μL

Primers (5 μM each)

2.0 μL

DNA提取液(發根基因組DNA)

2.0 μL

d.d.H2O

up to 25.0 μL

 

反應條件:


95°C

10 min.

酶活性化處理

95°C

30 sec.

45次循環

60°C

1 min.

 

?溶解曲線分析

  <結果>

                                                              溶解曲線

ISOHAIR EASY

                                  標準曲線

ISOHAIR EASY

       使用Human genomic DNA(Clontech公司),以控制標準曲線。



◆Data 2: LAMP法的利用


  使用ISOHAIR EASYAB 2人的各3根毛發配制成4 μlDNA提取液,將其作為模板,使用Isothermal Master Mix利用LAMP引物擴增目標域(IL28B基因),并對其擴增產物進行會合曲線分析。(裝置:Genie? II)


Isothermal Master Mix

15.0 μL

LAMP Primers

2.5 μL

DNA提取液(發根基因組DNA)

4.0 μL

d.d.H2O

up to 25.0 μL

擴增

63°C、60分鐘

會合曲線分析

98°C-75°C、0.05°C/秒


  <結果>

                   溶解曲線

ISOHAIR EASY

               Annealing Derivative

ISOHAIR EASY

  (注)LAMP法的原理是使用4種引物及鏈置換DNA 合成酶,在一定溫度下(65°C左右),使其發生反應,從而擴增基因。



◆備注

  • 本產品為實驗研究用試劑。請勿用于醫療或其他用途。

◆產品列表


ISOHAIR    EASY (100次用量)

產品

包裝

保存

備注

ISOHAIR EASY

1,000 μL × 5瓶

-20°C



◆相關產品

  • 毛發?爪提取人DNA試劑盒 ISOHAIR

  • 教育用生物實驗 ISOHAIR Jr.

    Q:  ISOHAIR(Code No. 315-03403)及ISOHAIR EASY(Code No. 319-07781)的區別是什么?

    A:  「ISOHAIR」與「ISOHAIR EASY」的區別如下表所示。ISOHAIR EASY可從發根簡單地提取DNA,必須使用有發根的樣品。

    ISOHAIR

    ISOHAIR EASY

    樣品

    ?人毛發: 
       發根樣本取毛發的發根處1cm左右、毛干樣本取發根樣本的前2~6cm。(亦可使用自然脫落的毛發)
    ?人指甲: 使用指甲鉗剪取指甲,再使用剪刀剪取邊約1mm的緣部分,剪取2個(0.5mg)左右。
    ?小鼠體毛:使用剪刀剪取一撮(約5mg)體毛。

    ?小鼠指甲:剪取1~2mm長度的指甲。
       *使用新鮮的樣品回收量更高。

    ?人的發根:
       
    取發根處1.5 cm。(肉眼無法確認是否為發根的材料或自然脫落的毛發可能無法提取足夠的核酸。)
        ISOHAIR EASY

    操作用時

    ?約1小時

    ?約30分鐘

    提取結果

    ?溶解毛發
       左:第一次孵化后(55℃, 20 分)
       右:第二次孵化后( 55℃, 5~10 分) 

     <完全溶解>
       ISOHAIR EASY

    ?使用ISOHAIR EASY進行孵化時,肉眼看不出變化。(肉眼看上去還沒有溶解,實際上已有DNA析出)