SCALEVIEW?-S4


產品編號 產品名稱 產品規格 產品等級 產品價格

SCALEVIEW?-S4球狀體·細胞透明化試劑

SCALEVIEW?-S4

SCALEVIEW?-S是組織透明化試劑。可通過使用SCALEVIEW?-S0 – SCALEVIEW?-SMt等六種產品進行組織透明化處理。

其中,可單獨使用SCALEVIEW?-S4透明化球狀體或細胞。只需將目標樣品浸入SCALEVIEW?-S4即可。


◆特點


● 只需浸泡即可實現簡單透明化

● 透明化耗時短(1日左右)

● 不需要特殊的設備

● 可配合熒光抗體標記和熒光素觀察

◆T47D細胞球狀體觀察實例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).


SCALEVIEW?-S4

圖1. SCALEVIEW?-S4透明化T47D細胞球體的圖像示例(細胞核使用Hoechst染色)4

       使用共聚焦顯微鏡Z-堆疊獲得的球狀體圖像。



SCALEVIEW?-S4


2. T47D細胞球狀體經諾考達唑處理后,使用組蛋白H3抗體的測量實例。

       通過SCALEVIEW?-S4的透明化處理,可觀察藥物施用對球狀體表面和內部的影響。


◆操作步驟圖示


SCALEVIEW?-S4

◆SCALEVIEW?-S4 Neurosphere的觀察實例

數據提供:

國立研究開發法人理化學研究所

腦神經科學研究中心細胞技能探索技術研究組/ 光量子工學研究中心生命光學技術研究組 濱裕先生、星田哲志先生、宮脇敦史先生

協助:olympus 株式會社



Neurosphere的觀察實例

(※試劑使用量推薦前處理和透明化均為各試劑:1.2mL。※熒光抗體標記基于AbScale方案。)


固定 前處理
灌注固定+固定
4%PFA/PBS(-)
【pH 7.6-7.8】
前處理1
SCALEVIEW?-S0
透明處理1
SCALEVIEW?-A2
透明處理2
8 M Urea Solution
透明處理3    SCALEVIEW?-A2 洗凈
deScale Solution
4 ℃, 3 day 37 ℃, 4 hr 37 ℃, 4 hr

37 ℃,

12 hr

37 ℃, 4 hr 4 ℃, 6 hr

熒光抗體標記 透明化 觀察

Blocking

1% Blocking Reagent(Roche)/

    PBS(-)

抗體標記【例:標記Iba1抗體】
AbScale Solution
洗凈
AbScale Solution
再固定
4% PFA/PBS(-)【pH 7.6-7.8】
洗凈
 deScale Solution
透明化

 SCALEVIEW?-S4

37 ℃,4 hr

固定
SCALEVIEW?-S4
搖動1小時后固定*
室溫,2 hr 37 ℃, >1 day

室溫,  

2 hr ×1、

1 hr ×1

室溫,1 hr 4 ℃,3 hr 37 ℃,4 hr 室溫

*透明化后,使用1.5%(wt / vol)瓊脂糖嵌入并固定。

成年大鼠海馬神經干細胞神經球狀體的三維免疫熒光  —使用AbScale法—


SCALEVIEW?-S4

參考文獻


1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

◆產品信息


產品編號 產品名稱 規格 包裝
194-18561 SCALEVIEW-S4
SCALEVIEW-S4組織透明化試劑
組織透明化用 250 mL

◆相關產品


產品編號 產品名稱 規格 包裝
193-18455 SCALEVIEW-A2
SCALEVIEW? 組織透明化試劑A2
組織透明化用 500 mL
196-18521 SCALEVIEW-S0
SCALEVIEW? 組織透明化試劑S0
組織透明化用 250 mL
041-34425 deScale Solution
透明化洗滌溶液
組織透明化用 500 mL
294-35631 See Through Chamber, 0.3mm thick
透明室,0.3mm厚
組織透明化用 10 set
291-35641 See Through Chamber, 0.5mm thick
透明室,0.5mm厚
組織透明化用 10 set
295-35661 See Through Chamber, 1.0mm thick
透明室,1.0mm厚
組織透明化用 10 set
292-35671 See Through Chamber, 2.0mm thick
透明室,2.0mm厚
組織透明化用 10 set
299-35681 See Through Chamber, 3.0mm thick
透明室,3.0mm厚   
組織透明化用 10 set


相關資料

SCALEVIEW?-S4

透明化試劑方法選擇流程.pdf

組織透明化試劑Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q組織透明化的原則

A:組織透明化通常是按下面的步驟進行的:

A:(a)固定 (b)透化 (c)脫色 (d)折射率匹配

 

Q:組織透明化的優勢

A:目前大多數可用的透明化技術,都是通過編碼熒光報告蛋白或者用熒光標記抗體進行后標記,從而可視化

A:組織中特定的蛋白。組織透明化成為了具有單細胞分辨率的組織3D成像中重要的一環。

 

Q:透明化技術的比較

A:下面是水性的透明化技術。

SCALEVIEW?-S4


SCALEVIEW?-S4

A:SeeDB(基于果糖的方法)在一些應用中有一定優勢。因為SeeDB不含去垢劑,所以對于透明化DiI(細胞膜

A:紅色熒光探針,一種神經示蹤劑)標記的樣品和使用光電關聯顯微鏡(CLEM)的情況下,SeeDB有著一定優

A:勢。另外SeeDB會產生自體熒光,有時候會對辨認未標記的神經元結構(如神經氈)起著一定幫助。

A:SeeDB2是為使用高NA物鏡的高分辨率成像而優化的技術;因此,當處理較大的組織時,CLARITY或者CUBIC

A:會是更好的選擇。

 

Q:切片厚度的最大值和最小值?

A:您應該根據您的物鏡的WD(工作距離)來決定切片的厚度。我們建議切片的厚度不要超過3mm。對于十分薄

A:且脆弱的樣品,我們建議使用瓊脂糖包埋。

A:使用CUBIC,可以讓全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重復性。

 

Q:試劑盒成分

A:具體如下:

A:1. SCALEVIEW-S試劑盒(299-79001)適用于20份1-2mm的切片樣品

A:A:1) SCALEVIEW-S0——100mL

A:A:2) SCALEVIEW-S1——100mL

A:A:3) SCALEVIEW-S2——100mL

A:A:4) SCALEVIEW-S3——100mL

A:A:5) SCALEVIEW-S4——100mL

A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100mL

 

A:2. SCALEVIEW-S試劑盒(290-80801)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。

A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250mL

A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250mL

A:A:3) Mounting Solution 1——40mL

A:A:4) Mounting Solution 2——40mL

 

A:3. SeeDB試劑盒(299-79901)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。

A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:6) SeeDB——50mL

 

A:4. SeeDB2試劑盒(294-80701)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。

A:A:1) Saponin(皂角苷)——5g

A:A:2) SeeDB2G solution——50mL

A:A:3) SeeDB2S solution——50mL

A:A:4) PBS——50mL

 

Q:樣品的保存

A:SCALEVIEW-S處理的樣品應在室溫下保存2至3周。您可以在2至3周內觀察SCALEVIEW-S透明化的樣品中的

A:熒光信號。

A:CUBIC處理的樣品應在室溫下保存1周。您可以在1周內觀察CUBIC透明化的樣品中的熒光信號。

A:SeeDB2G處理的樣品應在冰箱中保存1年,而SeeDB2S處理的樣品則可在室溫下保存1年。您可以在1年內觀

A:察SeeDB透明化的樣品中的熒光信號。

 

Q:抗體的熒光標記

A:應在進行透明化前就進行抗體的熒光標記。

 

Q:適用于SCALEVIEW-S的顯微鏡

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

 

Q:適用于CUBIC的顯微鏡

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)

 

Q:適用于SeeDB2的顯微鏡

A:Confocal(最好使用高NA的油浸鏡頭)

A:STED(Leica Microsystems)

A:SR-SIM(Carl Zeiss)

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Airyscan(Carl Zeiss)

A:HyVolution(Leica Microsystems)

A:Two-photon(最好使用復合浸沒鏡頭)

A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸鏡頭)

A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制鏡面的設備)

 

Q:重構

A:對于定量用途,我們建議使用Neurolucida系統(MBF)。我們同樣測試了VAST Lite用于成像用途時的表

A:現。重構時也可以使用開源軟件。例如,Vaa3d可以處理大量的拼接圖像的數據。

 

Q:物鏡推薦

SCALEVIEW?-S4

 

Q:其他物種?其他器官?

A:對于昆蟲樣品和魚類樣品,建議選擇CUBIC。

A:昆蟲相關文獻:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

A:魚類相關文獻:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

  對于多細胞球狀體,選擇SCALEVIEW-S會更好。

  https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

 

參考文獻


1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).