原裝進口-蛋白肽測序試劑-質譜級賴胺酰肽鏈內切酶

原裝進口-蛋白肽測序試劑-質譜級賴胺酰肽鏈內切酶
125-05061 現貨促銷 【活動期限:即日起至2018/2/10】

【詳細說明】

原裝進口-蛋白肽測序試劑-質譜級賴胺酰肽鏈內切酶

125-05061 現貨促銷 【活動期限:即日起至2018/2/10】

本產品是質譜分析前處理時最常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團 C 末端 的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸 基團的多肽,增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。

來源:細菌

外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液,pH 8)

活性:0.03~0.07AU/vial

分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)

溶解性:溶于水或緩沖液

穩定性:溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中,可在4℃穩定保存2年;在pH值6.0-11.0 30℃時能穩定保存,但溫度超過50℃時不穩定。

最適pH值:9.0~9.5

等電點:6.9~7.0

底物特異性:

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制劑:DFP,PMSF,TLCK

 

◆特點

blob.png●??高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

●??提高裂解效率、增加肽段數量

●??根據使用量特意制備小包裝,方便使用

 

 

◆應用

分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內切酶(Lep) 和Tp 與Lep聯用進行膠內酶切的效果比較。

牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過SDS-PAGE 獲得,然后分別用Tp、Lep 和Lep+Tp 進行酶切,再用MALDI-TOFMS 法進行分析。

這些蛋白酶的實驗效果見下表。

表 1:Tp、Lep 和 Lep+Tp 的結果對照

這些結果表明 Lep 酶解的錯誤裂解率最低。Tp 酶解時加入 Lep 后,錯誤裂解率有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。

Tp Lep Lep +Tp
裂解位點 精氨酸和賴氨酸的C端 賴氨酸的C端 精氨酸和賴氨酸的C端
錯誤裂解率

( ?錯誤裂解所占比例 ?)

多(8%) 很少(0%) 少(3%)
鑒定出的多肽數量 17 19 22

 

blob.png

胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內切酶 (Lep)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質譜結果對照圖。

Lep+Tp酶切后,可以在m/z=2000時得到吸收峰,而單獨的Tp酶切在m/z=2000時沒有吸收峰。該結果表明Lep可以提高測序覆蓋度。

( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

 

賴氨酰肽鏈內切酶

賴氨酰肽鏈內切酶,最初由Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵,用于蛋白測序和Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高,在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。

外觀 凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8) 活性 見包裝
分子量 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE) 溶解性 易溶于水或緩沖液
最佳pH 9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性pH) 等電點 6.9-7.0
抑制劑 DFP、PMSF、TLCK 來源 細菌
穩定性 ??? 溶于pH 值5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩定保存。溶于pH 值6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩定保存,但是50℃及以上不穩定。
單位定義  一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol 對硝基苯胺所需的酶量。
底物特異性  水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
 非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

◆產品列表 原裝進口-蛋白肽測序試劑-質譜級賴胺酰肽鏈內切酶

產品編號 產品名稱 產品規格 產品等級
125-05061 Lysyl?Endopeptidase,?MS?Grade
賴氨酰肽鏈內切酶,MS級
20μg?x?5 質譜級
125-02543 Lysyl?Endopeptidase?(R)
賴氨酰肽鏈內切酶
1vial(2AU) for?Biochemistry
129-02541 Lysyl?Endopeptidase?(R)
賴氨酰肽鏈內切酶
1vial(10AU) for?Biochemistry